{"id":1854,"date":"2021-03-05T18:12:24","date_gmt":"2021-03-05T21:12:24","guid":{"rendered":"https:\/\/www.labguemes.com.ar\/web\/?p=1854"},"modified":"2021-04-03T19:59:57","modified_gmt":"2021-04-03T22:59:57","slug":"deteccion-de-herpes-simple-1-y-2-por-pcr-en-tiempo-real-e-identificacion-por-high-resolution-melting","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.labguemes.com.ar\/web\/deteccion-de-herpes-simple-1-y-2-por-pcr-en-tiempo-real-e-identificacion-por-high-resolution-melting\/","title":{"rendered":"Detecci\u00f3n de Herpes simple 1 y 2 por PCR en Tiempo Real e identificaci\u00f3n por High Resolution Melting"},"content":{"rendered":"<p align=\"JUSTIFY\">Los Herpes simple 1 y 2 (HSV1 y HSV2) son pat\u00f3genos virales de distribuci\u00f3n mundial que pertenecen a la familia\u00a0<em>Herpesviridae<\/em>, subfamilia\u00a0<em>alfaherpesviridae<\/em>, responsables de lesiones mucocut\u00e1neas que pueden progresar a infecciones sist\u00e9micas<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">El HSV1 puede generar cuadros severos y mortales como es el caso de la encefalitis herp\u00e9tica o de la meningitis as\u00e9ptica. El HSV2 puede producir los mismos cuadros del HSV1 siendo muy severos en el reci\u00e9n nacido, al contraer la infecci\u00f3n por contacto con lesiones activas en el canal de parto.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">El diagn\u00f3stico de las encefalitis y meningitis virales deben ser realizadas por t\u00e9cnicas de detecci\u00f3n de ADN ya que los m\u00e9todos serol\u00f3gicos no son adecuados. Las t\u00e9cnicas de PCR en Tiempo Real permiten obtener resultados de alta sensibilidad y especificidad en pocas horas. La t\u00e9cnica de High Resolution Melting (HRM) es un nuevo m\u00e9todo de an\u00e1lisis que permite caracterizar productos de PCR en base a la longitud de la secuencia, el contenido de GC y la complementariedad de secuencia de ADN. El an\u00e1lisis por HRM se puede utilizar para determinar genotipos y especies de diferentes virus y bacterias.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un m\u00e9todo in house para la determinaci\u00f3n de ambos tipos virales, utilizando PCR en Tiempo Real para la detecci\u00f3n y la t\u00e9cnica de HRM para su diferenciaci\u00f3n.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">Se seleccionaron tres pares de primers gen\u00e9ricos para Herpes simple los cuales amplifican fragmentos de diferente tama\u00f1o a partir de ADN viral (290 pb, 146 pb, 124 pb). Una vez seleccionados y sintetizados los primers se realiz\u00f3 la puesta a punto de la amplificaci\u00f3n con los controles positivos de HSV1 y HSV2. En cada caso se busc\u00f3 obtener las mejores condiciones de amplificaci\u00f3n que no produzcan falsos positivos ni falsos negativos. Se seleccionaron los primers que amplifican el fragmento de 124 pb dado que presentaron las mejores caracter\u00edsticas de amplificaci\u00f3n. Se realizaron pruebas de sensibilidad para ambos tipos de Herpes simple y de especificidad con otros virus de la familia Herpesviridae. Se calcul\u00f3 la eficiencia de reacci\u00f3n para ambos tipos de Herpes siendo de 93 % y de 94% para HSV1 y HSV2, respectivamente. Para diferenciar HSV1 de HSV2 se utiliz\u00f3 la t\u00e9cnica de HRM. HSV1 y HSV2 presentaron diferencias en las curvas de disociaci\u00f3n evidenciadas por esta t\u00e9cnica, permitiendo de este modo la diferenciaci\u00f3n entre ambos virus.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">Se logr\u00f3 desarrollar una t\u00e9cnica de PCR en Tiempo Real para la detecci\u00f3n de Herpes simple 1 y 2. La posterior aplicaci\u00f3n de la t\u00e9cnica de HRM permiti\u00f3 diferenciar entre ambos tipos virales, logrando de este modo un m\u00e9todo sensible y r\u00e1pido para ser utilizado en la pr\u00e1ctica cl\u00ednica.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">El Laboratorio G\u00fcemes realiza an\u00e1lisis para detecci\u00f3n de Herpes Simple 1 y 2 por PCR.<\/p>\n<p align=\"JUSTIFY\">Fuente:\u00a0http:\/\/www.farestaie.com<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Los Herpes simple 1 y 2 (HSV1 y HSV2) son pat\u00f3genos virales de distribuci\u00f3n mundial que pertenecen a la familia\u00a0Herpesviridae, subfamilia\u00a0alfaherpesviridae, responsables de lesiones mucocut\u00e1neas que pueden progresar a infecciones sist\u00e9micas El HSV1 puede generar cuadros severos y mortales como es el caso de la encefalitis herp\u00e9tica o de la meningitis as\u00e9ptica. 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El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un m\u00e9todo in house para la determinaci\u00f3n de ambos tipos virales, utilizando PCR en Tiempo Real para la detecci\u00f3n y la t\u00e9cnica de HRM para su diferenciaci\u00f3n. Se seleccionaron tres pares de primers gen\u00e9ricos para Herpes simple los cuales amplifican fragmentos de diferente tama\u00f1o a partir de ADN viral (290 pb, 146 pb, 124 pb). Una vez seleccionados y sintetizados los primers se realiz\u00f3 la puesta a punto de la amplificaci\u00f3n con los controles positivos de HSV1 y HSV2. En cada caso se busc\u00f3 obtener las mejores condiciones de amplificaci\u00f3n que no produzcan falsos positivos ni falsos negativos. Se seleccionaron los primers que amplifican el fragmento de 124 pb dado que presentaron las mejores caracter\u00edsticas de amplificaci\u00f3n. Se realizaron pruebas de sensibilidad para ambos tipos de Herpes simple y de especificidad con otros virus de la familia Herpesviridae. Se calcul\u00f3 la eficiencia de reacci\u00f3n para ambos tipos de Herpes siendo de 93 % y de 94% para HSV1 y HSV2, respectivamente. Para diferenciar HSV1 de HSV2 se utiliz\u00f3 la t\u00e9cnica de HRM. HSV1 y HSV2 presentaron diferencias en las curvas de disociaci\u00f3n evidenciadas por esta t\u00e9cnica, permitiendo de este modo la diferenciaci\u00f3n entre ambos virus. Se logr\u00f3 desarrollar una t\u00e9cnica de PCR en Tiempo Real para la detecci\u00f3n de Herpes simple 1 y 2. La posterior aplicaci\u00f3n de la t\u00e9cnica de HRM permiti\u00f3 diferenciar entre ambos tipos virales, logrando de este modo un m\u00e9todo sensible y r\u00e1pido para ser utilizado en la pr\u00e1ctica cl\u00ednica. El Laboratorio G\u00fcemes realiza an\u00e1lisis para detecci\u00f3n de Herpes Simple 1 y 2 por PCR. 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